⑵、無菌操作。所有接觸培養(yǎng)基、能耐高溫的器 用干熱法(140~150OC)處理,對不耐高溫的器具采用化學方法滅菌消毒。為解決接種時需要在火焰上進行的問題(因箱內(nèi)幾乎無空氣),增添了一只300瓦的電爐,但因溫度高易灼壞外植體,故又加設了通風降溫的設施。為了減少刀具第二次在環(huán)境中污染,高溫消毒后安放在一端封閉的筒內(nèi),同時不斷鼓入凈化的空氣加以冷卻,確保外植體安然無恙地進入營養(yǎng)基瓶中。所有進入箱內(nèi)的物品均需酒精消毒后才放進,凡是帶菌者不許入箱。箱體消毒程序是酒精噴霧后紫外線消毒,并定期用甲醛加高錳酸鉀進行熏蒸.。
⑶、選用適宜的培養(yǎng)基配方。誘導一分化一生根均采用MS基加萘乙酸、細胞分裂素。但不同的生長階段還需做成分上的調整,特別是生根時,由于蘭花生根較其他品種花卉難些,故采用高濃度的NAA浸泡數(shù)秒的做法,效果良好。
⑷、外植體的采取、消毒。外植體以長根的幼苗(未展開葉),隨采隨接種,成活率較高(接種時節(jié)以10月至次年2月好)。外植體消毒,筆者采取0.1升汞加0.1%濃鹽酸多次消毒的辦法,效果更佳。
⑸、培養(yǎng)環(huán)境。光照1000~2000勒,10~16小時,培養(yǎng)溫度26OC±2 OC,空氣溫度應控制在較低的水平(70%~80%),否則極易再一次污染。
①、在家庭中建立小型組培室是可行的,它的投資少(可充分利用家中的條件)。從籌備到進行實驗只花去數(shù)百元,該實驗設備也可用于開展其他品種(如木本、藥用植物等)的研究工作。
②、無菌操作必須從思想上重視,操作上謹慎才是,否則損兵折將,后果不堪設想。
③、若無實體顯微鏡,只能做以芽生芽的實驗。采取一些措施如分期切制切樣品、液體加旋轉床的方案,是取得大批量類原球莖的一種途徑,其繁殖速度也會有所突破。
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